食物中碘的測定方法

1.原理
砷鈰接觸法是利用在酸性環(huán)境中碘對亞砷酸與硫酸鈰氧化還原反應(yīng)的催化作用來測定碘含量：
　

2Ce⁺⁴+H₃As⁺³O₃+H₂O→2Ce⁺³+H₃As⁺⁵O₄
2Ce⁺⁴ + 2I^-→2Ce⁺³ + I₂
I₂ + As⁺³→ 2I^- + As⁺⁵

由于Ce+4氧化碘離子成元素碘，然而元素碘又被As+3還原成碘離子，如此反復(fù)直至As+3、Ce+4全部消耗為止，當(dāng)反應(yīng)條件加以控制時，則反應(yīng)速度與碘離子濃度成一定數(shù)值關(guān)系，碘離子越多反應(yīng)速度越快，根據(jù)硫酸鈰的退色程度來進(jìn)行比色定量分析，從而測定出碘的含量。本方法*低檢出限0.001μg。
2.適用范圍
適用于檢測各類食物、飼料及生物樣品中的碘含量。
3.儀器與設(shè)備
（1） 恒溫水浴
（2） 馬福爐
（3） 烤箱
（4） 離心機(jī)
（5） 秒表
（6） 722分光光度計
4.試劑
本試驗所用試劑規(guī)格必需在分析純以上，水為無碘水或去離子水，電阻率在500萬歐姆以上。
（1） 0.44mol/L硫酸鋅：稱取100g優(yōu)級純硫酸鋅溶于少量水中，完全溶解后至于1L容量瓶中，加水稀釋至刻度。
（2） 0.5mol/L氫氧化鈉：稱取20g優(yōu)級純氫氧化鈉溶于少量水中，完全溶解后移入1L容量瓶中加水稀釋至刻度。
（3） 2.17mol/L碳酸鉀溶液：稱取30g優(yōu)級純碳酸鉀溶于少量水中，完全溶解后移入100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。
（4） 0.005mol/L亞砷酸溶液：準(zhǔn)確稱取三氧化二砷0.986g，溶于溫?zé)岬?5ml0.5mol/L氫氧化鈉中，將此液加入850ml水中，再加入優(yōu)級純濃硫酸39.6ml，濃鹽酸20ml，加熱條件下不斷攪拌直至完全溶解，冷卻后移入1L容量瓶，加水定容至1000ml。
? 三氧化二砷的溶解性較差，如果當(dāng)時不能完全溶解，可放至過夜后再定容。
（5）0.02mol/L硫酸鈰：稱取硫酸鈰8.087g，溶于水中，加優(yōu)級純濃硫酸44ml，冷卻后加水定容至1000ml。此溶液為杏黃色。
（6） 4.44mol/L氯化鈉：稱取優(yōu)級純氯化鈉26g，溶解后定容至100ml。
（7） 碘標(biāo)準(zhǔn)溶液：
A)碘標(biāo)準(zhǔn)儲備液（0.1mg/ml）：準(zhǔn)確稱取在110℃烘至恒重的優(yōu)級純碘酸鉀0.1686g，用少量水溶解后移入容量瓶，*后定容至1000ml。
B) 碘標(biāo)準(zhǔn)中間液（1μg/ml）：吸取1ml（4.1.）溶液定容至100ml。
C) 碘標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.1μg/ml）：吸取1ml（4.2.）溶液定容至10ml，用時現(xiàn)配。
5.操作步驟
5.1稱取適量樣品放入坩堝中，加入0.44mol/L硫酸鋅0.5ml，2.17mol/L碳酸鉀0.5ml混勻后放置1小時，然后至于110℃烤箱中，烤14～16小時，直至完全干燥。
?注意：（1）加ZnSO4和KCO3的目的是為了在灰化時起到固定碘并促進(jìn)消化的作用，稱樣量較大時，硫酸鋅溶液和碳酸鉀溶液的用量可加倍；但稱樣量不宜過大，否則會造成灰化不完全。（2）在110℃條件下烘烤的目的是為了固定樣品中的碘，因此一定要控制好溫度，當(dāng)溫度過高時會導(dǎo)致碘的升華，導(dǎo)致測定結(jié)果偏低。
5.2將坩堝置于灰化爐中550℃灰化4～8小時，灰化后的樣品必須無明顯炭粒，呈灰白色，如仍有炭粒，可加一至二滴水再于110℃烤箱中烤干后，進(jìn)行**次灰化，直至完全呈灰白色。
?注意：（1）一般情況下，植物樣品灰化5-6小時即可呈灰白色，而動物樣品尤其是脂肪含量較高的樣品需要灰化8小時以上方可呈灰白色。（2）灰化爐的升溫過程*好分為兩個階段：250℃2小時，550℃ 2-6小時
5.3加5ml亞砷酸溶液溶解坩堝內(nèi)的樣品，溶液無炭粒懸浮，并且清亮、透明，將液體移入離心管中，3000rpm離心5分鐘，取上清夜。
? 注意：在坩堝中加入亞砷酸溶液后，要用玻璃棒不斷攪拌，使得灰化后的樣品完全溶于亞砷酸溶液中。
5.4在6支標(biāo)準(zhǔn)系列管中依次加入0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml碘標(biāo)準(zhǔn)使用液，相當(dāng)0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10μg碘。在樣品管中加入適量樣品液，在標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管中分別加入亞砷酸溶液，使管中溶液總體積為5ml，然后均加入4.44mol/L氯化鈉0.5ml。
? 注意：如果樣品碘含量過高，要用亞砷酸溶液進(jìn)行一定量的稀釋，注意不要用去離子水。
5.5將以上各管搖勻后，置于32±0.2℃恒溫水浴中，同0.02mol/L硫酸鈰溶液一并保溫10分鐘。
5.6每隔30秒將0.5ml 0.02mol/L硫酸鈰加入一管中，迅速搖勻，放回到32±0.2℃恒溫水浴中，在**管加入硫酸鈰溶液15分鐘后每隔30秒比色一管，波長為410nm，比色前用水將儀器調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)系列管和樣品管的吸光度值。
? 注意：加入的硫酸鈰溶液的量要準(zhǔn)確，否則硫酸鈰的褪色速度與碘含量不呈相關(guān)性。
6.結(jié)果計算
根據(jù)該反應(yīng)原理，在反應(yīng)中碘化物的催化反應(yīng)速度隨樣品中碘化物含量的增多而加快，在半對數(shù)坐標(biāo)中呈直線，故采用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸法計算、分析結(jié)果，并根據(jù)樣品吸光度值的對數(shù)查出各測定管的碘含量。
logY=-Bc+logA
式中：
logY──測定樣品的吸光度值的對數(shù)值
c ──測定樣品管中的碘含量（由計算器直接得出），μg：
B ──曲線的斜率
logA──曲線的截距
測得樣品管及試劑空白管的碘含量后，根據(jù)下式計算樣品中的碘濃度：
       f·（c-c0）
X = -----------------×100
           M
式中：
X──測定樣品中的碘濃度，μg/100g；
c──測定樣品管中的碘含量（由計算器直接得出），μg；
c0──試劑空白液的碘含量，μg；
f──稀釋倍數(shù)；
m-樣品質(zhì)量，g。
7.注意事項
（1） 實驗所用的各種玻璃容器，如試管、坩堝、刻度吸管、移液管等要用2 mol/L的鹽酸浸泡2小時，然后再用無碘水進(jìn)行沖洗。
（2） 實驗臺及烤箱內(nèi)壁要定期用硫代硫酸鈉溶液清洗，以便去除殘留在實驗臺表面或烤箱內(nèi)壁的碘。
（3）碘測定實驗臺要相對獨立，盡量和其他實驗臺隔離開，以免造成污染；實驗所用各種容器不要與其他實驗容器混用，以免造成污染。